В ооцит проникает не весь сперматозоид, а только его ядро, несущее гаплоидный набор хромосом (23), которое образует мужской пронуклеус. Последний сближается с ядром ооцита женским пронуклеусом, образуя, так называемый, синкарион. Начинается великое таинство природы — эмбриогенез, или развитие эмбриона.
Первое митотическое деление
После того, как сперматозоид проник в яйцеклетку, она называется зиготой. В зиготе сразу же запускаются механизмы раннего эмбриогенеза: сближение пронуклеусов и удвоение их ДНК. Эта подготовка к первому делению занимает около суток. В первом делении участвуют оба пронуклеуса — их оболочки разрушаются, а хромосомы образуют единую материнскую звезду. Все это сопровождается медленным продвижением зиготы по маточной трубе в сторону матки.
Дробление
В течение последующих 2-4-х суток происходит дробление — деления без роста дочерних клеток. Таким образом общий размер плодного яйца не увеличивается. Клетки, которые называются теперь бластоцистами, делятся неравномерно и их размеры с каждым делением становятся все меньше. Развитие эмбриона в период дробления проходит несколько стадий:
- Стадия бластулы. Характеризуется асинхронным делением бластомеров, которые пока сохраняют равный потенциал развития, то есть разобщив их на этом этапе, можно получить два полноценных зародыша. Плодное яйцо находится в маточной трубе.
- Стадия морулы. Активация процессов, которые запускают дифференцировку клеток — их разделение по виду и потенциалу. Бластомеров в плодном яйце более 10. Яйцо приближается к полости матки. Через четверо суток, когда в моруле уже 32 клетки, в ее центре определяются несколько клеток более темного цвета — предшественники будущего плода.
- Бластоциста. К концу 4-5 суток происходит образование бластоцисты, которая представляет собой зародышевый пузырек, наполненный жидкостью. В это время плодное яйцо уже достигает полости матки, где в свободном состоянии находиться до двух суток. В бластоцисте уже четко определяется два компонента — трофобласт, которые являются предшественниками хориона, эмбриобласт, представляющий собой скопление темных клеток у одного из полюсов плодного яйца, а также полость, заполненная жидкостью (бластоцель).
К 5 суткам от момента оплодотворения число клеток эмбриона превышает 100. На этапе бластоцисты в трофобласте появляются выросты, которые постепенно разрушают зону пеллюцида вокруг зародыша, готовя его к имплантации в стенку матки. С этого момент деление клеток сопровождается ростом эмбриона. На 5-7 сутки, с имплантацией зародыша в эндометрий, заканчивается зародышевый и начинается эмбриональный период, который продлиться до 8 недели беременности.
ЭКО — это зачастую последняя надежда для семейных пар, попытки которых зачать ребенка оказываются неудачными.
В СССР первый успешный протокол ЭКО состоялся в 1985 году. В Москве, а затем и в Ленинграде, на свет появились двое детей, зачатых в пробирке и затем подсаженных матерям, — девочка и мальчик. Далее программа ЭКО была признана на государственном уровне и указом Президента РФ включена в программу развития демографии. На нее стали давать квоты, экстракорпоральное оплодотворение по показаниям теперь можно делать по полису обязательного медицинского страхования.
Многие пациенты, вступающие в протокол ЭКО, задаются вопросом: «Что это такое, как происходит оплодотворение вне тела?». Ответы на эти и другие вопросы Вы найдёте в этой статье.
Итак, что же такое ЭКО?
ЭКО — экстракорпоральное, т. е. происходящее вне тела человека, оплодотворение. Часто можно услышать словосочетание «дети из пробирки», что не совсем верно, т. к. оплодотворение ооцитов и дальнейшее культивирование эмбрионов происходит не в пробирке в буквальном смысле, а в специальных чашках. В зависимости от способа культивирования эмбрионы могут расти в лунках, где специальной среды достаточно большое количество, либо в каплях, количество жидкости в которых едва ли достигает нескольких микролитров. Таким образом, культивирование в каплях даёт нам прекрасную возможность создавать для каждого эмбриона свой «домик», свой микромир, в котором он живёт и усиленно развивается от трёх до пяти дней. Затем эмбриолог выбирает самый красивый и жизнеспособный эмбрион для переноса, и дальнейшее его развитие происходит уже в полости матки женщины.
Итак, рассмотрим, какие этапы включает в себя эмбриологическая часть программ ВРТ?
1. Трансвагинальная пункция фолликулов — это слаженная работа всего персонала. Врач-репродуктолог выполняет саму манипуляцию забора фолликулярной жидкости через специальную иглу, а эмбриолог при помощи микроскопа находит в фолликулярной жидкости ооцит-кумулюсные комплексы. Ооцит-кумулюсный комплекс представляет собой сам ооцит, окружённый клетками кумулюса.
Вот такими мы их видим в окулярах микроскопа. Эти клетки очень плотно облепляют ооцит и называются «корона радиата». Они защищают и питают ооцит, а на гиалуроновую кислоту, которая содержится в них, бегут зрелые сперматозоиды. Таким образом, ооцит, можно сказать, защищается от оплодотворения некачественным сперматозоидом.
По завершении пункции фолликулов наступает следующий этап:
2. Исследование эякулята и его обработка в специальном градиенте плотности. Эта манипуляция делается для того, чтобы выделить в осадок подвижные жизнеспособные сперматозоиды и очистить их от других компонентов эякулята. Вот так, например, выглядит образец эякулята до обработки (здесь мы можем наблюдать сами сперматозоиды различного качества, клетки сперматогенеза, единичные лейкоциты) и вот образец после обработки (чистые и красивые сперматозоиды).
В зависимости от качества исходного эякулята эмбриолог принимает решение о проведении классического ЭКО или ИКСИ.
При обычном ЭКО семенная жидкость добавляется в чашку с яйцеклетками и сперматозоиды самостоятельно оплодотворяют ооциты. Но бывают тяжёлые формы мужского бесплодия, когда мы имеем в наличии единичные сперматозоиды. Иногда даже приходится работать с биоптатом яичка при невозможности получить материал естественным путем. В таких случаях эмбриолог проводит процедуру ИКСИ, вводя с помощью специального микроинъектора единичный сперматозоид в яйцеклетку.
Через 16-18 часов после процедуры оценивается оплодотворение.
3. Культивирование эмбрионов.
С момента оплодотворения это уже не 2 отдельные клетки, а эмбрион. Далее — дробление, морула, бластоциста, выход бластоцисты, так называемый хетчинг. Самостоятельный хетчинг не всегда происходит до переноса, чаще эмбрион покидает оболочку, уже находясь в матке. Но все же иногда эмбриону хорошего качества требуется проведение вспомогательного рассечения блестящей оболочки перед переносом в полость матки. Особенно это касается девитрифицированных (размороженных) эмбрионов, оболочка которых может становиться менее растяжимой.
4. Перенос эмбриона теоретически может осуществляться на любой стадии развития эмбриона. Мы стараемся культивировать по возможности эмбрионы до 5-6 суток для лучшей селекции. В «свежих» циклах переносим как правило один эмбрион, оставшиеся витрифицируем. Витрификация — метод мгновенной заморозки. В своей работе мы используем качественные, проверенные среды, которые обеспечивают весьма успешную разморозку. % удачно размороженных эмбрионов в нашей лаборатории достигает 99.
После процедуры переноса эмбриона женщина находится несколько минут в положении лежа, а затем отправляется домой. В последующие дни следует вести обычный образ жизни, исключая тяжелые физические нагрузки и вредные привычки.
Об успешности проведенной программы ВРТ можно судить по положительным тестам на беременность, проводимым дома, и лабораторному анализу на B- ХГЧ.
